Javascript одоогоор таны хөтөч дээр идэвхгүй байна.Javascript идэвхгүй болсон үед энэ вэб сайтын зарим функц ажиллахгүй.
Хавьер Фидалго, * Пьер-Антуан Деглесне, * Родриго Арройо, * Лилиан Сепулведа, * Евгения Раннева, Филипп Депрезийн шинжлэх ухааны тэнхим, Skin Tech Pharma Group, Кастелло Д'Эмпюри, Испани, Каталони * Эдгээр зохиогчид энэ ажлын талаар зарим ойлголттой байна. оруулсан хувь нэмэр: Гиалуроны хүчил (HA) нь гоо зүйн зорилгоор арьсны дүүргэгчийг үйлдвэрлэхэд ашигладаг байгалийн гаралтай полисахарид юм.Хүний эд эсэд хагас задралын хугацаа хэд хоног байдаг тул HA-д суурилсан арьсны дүүргэгчийг химийн аргаар өөрчилж, бие махбодид амьдрах хугацааг уртасгадаг.Арилжааны HA-д суурилсан дүүргэгчийн хамгийн түгээмэл өөрчлөлт бол HA гинжийг хөндлөн холбохын тулд 1,4-бутандиол диглицидилийн эфирийг (BDDE) ашиглах явдал юм.Үлдэгдэл буюу урвалд ороогүй BDDE-ийг хоргүй гэж үзнэ<2 сая тутамд (ppm);Иймээс өвчтөний аюулгүй байдлыг хангахын тулд арьсны эцсийн дүүргэгч дэх үлдэгдэл BDDE-ийн хэмжээг тодорхойлох шаардлагатай.Материал ба арга: Энэхүү судалгаа нь шингэн хроматографи болон масс спектрометрийн (LC-MS) хослуулан шүлтлэг нөхцөлд BDDE ба HA-ийн хоорондох хөндлөн холбоосын урвалын дайвар бүтээгдэхүүнийг илрүүлэх, тодорхойлох талаар тайлбарласан.Үр дүн: Янз бүрийн шинжилгээний дараа HA-BDDE гидрогелийг халдваргүйжүүлэхэд ашигласан шүлтлэг нөхцөл, өндөр температур нь энэхүү шинэ дагалдах бүтээгдэхүүн болох “пропилен гликол төст” нэгдэл үүсэхэд нөлөөлсөн болохыг тогтоосон.LC-MS шинжилгээгээр дайвар бүтээгдэхүүн нь BDDE-тэй ижил моноизотопын масстай, хадгалах хугацаа (tR) өөр, хэт ягаан туяаны шингээх (λ=200 нм) өөр горимтой болохыг баталсан.BDDE-ээс ялгаатай нь LC-MS шинжилгээнд хэмжилтийн ижил нөхцөлд энэхүү дайвар бүтээгдэхүүн нь 200 нм-д илүү өндөр илрүүлэх хурдтай байдаг нь ажиглагдсан.Дүгнэлт: Эдгээр үр дүн нь энэхүү шинэ нэгдлийн бүтцэд эпоксид байхгүй болохыг харуулж байна.Арилжааны зорилгоор HA-BDDE гидрогель (HA арьсны дүүргэгч) үйлдвэрлэхэд олдсон энэхүү шинэ дайвар бүтээгдэхүүний эрсдлийг үнэлэх хэлэлцүүлэг нээлттэй байна.Түлхүүр үг: гиалуроны хүчил, HA арьсны дүүргэгч, хөндлөн холбоос гиалуроны хүчил, BDDE, LC-MS шинжилгээ, BDDE дайвар бүтээгдэхүүн.
Гиалуроны хүчил (HA) дээр суурилсан дүүргэгч нь гоо сайхны зориулалтаар ашигладаг хамгийн түгээмэл бөгөөд алдартай арьсны дүүргэгч юм.1 Энэхүү арьсны дүүргэгч нь ихэвчлэн >95% ус, 0.5-3% HA-аас бүрдэх гидрогель бөгөөд энэ нь гель шиг бүтэцтэй болгодог.2 HA нь полисахарид бөгөөд сээр нуруутан амьтдын эсийн гаднах матрицын гол бүрэлдэхүүн хэсэг юм.Орцуудын нэг.Энэ нь гликозидын холбоогоор холбогдсон (1,4)-глюкуроны хүчил-β (1,3)-N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) давтагдах дисахаридын хэсгүүдээс бүрдэнэ.Энэхүү дисахаридын загвар нь бүх организмд ижил байдаг.Зарим уурагт суурилсан дүүргэгчтэй (коллаген гэх мэт) харьцуулахад энэ шинж чанар нь HA-ийг био нийцтэй молекул болгодог.Эдгээр дүүргэгч нь амин хүчлийн дарааллын өвөрмөц байдлыг харуулж чаддаг бөгөөд үүнийг өвчтөний дархлааны систем хүлээн зөвшөөрдөг.
Арьсны дүүргэгч болгон хэрэглэх үед HA-ийн гол хязгаарлалт нь гиалуронидаза гэж нэрлэгддэг ферментийн тодорхой гэр бүл байдаг тул эд эс дотор хурдан эргэлтэнд ордог.Одоогийн байдлаар HA-ийн бүтэц дэх хэд хэдэн химийн өөрчлөлтүүд нь эд эс дэх HA-ийн хагас задралын хугацааг уртасгах талаар тайлбарласан.3 Эдгээр өөрчлөлтүүдийн ихэнх нь HA гинжийг хөндлөн холбох замаар гиалуронидазын полисахарид полимерт нэвтрэх боломжийг багасгахыг оролддог.Иймээс HA-ийн бүтэц ба хөндлөн холбогч бодисын хооронд гүүр болон молекул хоорондын ковалент холбоо үүссэний улмаас хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогель нь байгалийн ХА-аас илүү ферментийн задралын эсрэг бүтээгдэхүүн үүсгэдэг.4-6
Одоогийн байдлаар хөндлөн холбоос бүхий HA үйлдвэрлэхэд ашигладаг химийн хөндлөн холбоосын бодисууд нь метакриламид, 7 гидразид, 8 карбодиимид, 9 дивинил сульфон, 1,4-бутандиол диглицидилийн эфир (BDDE) ба поли (этилен гликол) диглицидилийн эфир юм.10 ,11 BDDE нь одоогоор хамгийн өргөн хэрэглэгддэг хөндлөн холбох агент юм.Эдгээр төрлийн гидрогель нь хэдэн арван жилийн турш аюулгүй болох нь батлагдсан боловч ашигласан хөндлөн холбох бодисууд нь цитотоксик, зарим тохиолдолд мутаген нөлөө үзүүлдэг реактив урвалжууд юм.12 Тиймээс эцсийн гидрогель дэх тэдгээрийн үлдэгдэл агууламж өндөр байх ёстой.Үлдэгдэл концентраци сая тутамд 2 хэсгээс (ppm) бага байвал BDDE нь аюулгүй гэж тооцогддог.4
Бага үлдэгдэлтэй BDDE концентраци, хөндлөн холбоосын зэрэг, HA гидрогелийн орлуулалтын байрлалыг илрүүлэх хэд хэдэн арга байдаг, тухайлбал хийн хроматографи, масс спектрометрийн (MS) холбосон хэмжээ хасах хроматографи, цөмийн соронзон резонансын (NMR) флюресценцийн хэмжилтийн аргууд, мөн. Диодын массив хосолсон өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматограф (HPLC).13-17 Энэхүү судалгаа нь шүлтлэг нөхцөлд BDDE ба HA-ийн урвалын үр дүнд үүссэн эцсийн хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийн дайвар бүтээгдэхүүнийг илрүүлэх, шинж чанарыг тодорхойлсон.HPLC ба шингэний хроматографи-масс спектрометр (LC-MS шинжилгээ).BDDE-ийн энэ дайвар бүтээгдэхүүний хоруу чанар нь тодорхойгүй байгаа тул бид түүний үлдэгдлийг эцсийн бүтээгдэхүүнд BDDE дээр хийдэг аргатай ижил аргаар тодорхойлохыг зөвлөж байна.
Олж авсан натрийн давсны HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) нь ~1,368,000 Да (Лорантын арга) 18 молекул жинтэй, 2.20 м3/кг өөрийн зуурамтгай чанар юм.Хөндлөн холбоосын урвалын хувьд BDDE (≥95%)-ийг Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA) -аас худалдаж авсан.Фосфатын буфержүүлсэн рН 7.4 давсны уусмалыг Сигма-Алдрих компаниас худалдаж авсан.LC-MS шинжилгээнд ашигласан бүх уусгагч, ацетонитрил болон усыг HPLC зэрэглэлийн чанараас худалдаж авсан.Шоргоолжны хүчил (98%) нь урвалжийн ангиллаар худалдаж авдаг.
Бүх туршилтыг UPLC Acquity систем (Waters, Milford, MA, USA) дээр хийж, цахилгаан шүрших иончлолын эх үүсвэрээр тоноглогдсон API 3000 гурвалсан дөрвөлжин масс спектрометрт холбогдсон (AB SCIEX, Framingham, MA, АНУ).
1% шүлтлэг (натрийн гидроксид, NaOH) байлцуулан 10% (w/w) натрийн гиалуронатын (NaHA) уусмалд 198 мг BDDE нэмснээр хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийн синтезийг эхлүүлсэн.Урвалын хольц дахь BDDE-ийн эцсийн концентраци 9.9 мг/мл (0.049 мМ) байв.Дараа нь урвалын хольцыг сайтар хольж, нэгэн төрлийн болгож, 45 градусын температурт 4 цаг байлгана.19 Урвалын рН нь ~12-д хадгалагдана.
Үүний дараа урвалын хольцыг усаар угааж, эцсийн HA-BDDE гидрогелийг шүүж, PBS буферээр шингэлж HA-ийн концентраци 10-25 мг/мл, эцсийн рН нь 7.4 байна.Үйлдвэрлэсэн хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийг ариутгахын тулд эдгээр бүх гидрогелийг автоклавт (20 минутын турш 120 ° C) хэрэглэнэ.Цэвэршүүлсэн BDDE-HA гидрогелийг анализ хийх хүртэл 4°С хэмд хадгална.
Хөндлөн холбоос бүхий HA бүтээгдэхүүнд агуулагдах BDDE-ийг шинжлэхийн тулд 240 мг дээжийг жинлэн төвийн нүхэнд (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; эзэлхүүн 0.5 мл) оруулж, өрөөний температурт 10,000 эрг/мин хурдаар центрифуг хийсэн. 10 минут.Нийт 20 мкл доош татах шингэнийг цуглуулж шинжилсэн.
Шүлтлэг нөхцөлд (1%, 0.1% ба 0.01% NaOH) BDDE стандартыг (Sigma-Aldrich Co) шинжлэхийн тулд дараах нөхцлүүд хангагдсан тохиолдолд шингэний дээжийг 1:10, 1:100, эсвэл хүртэл байна. 1:1,000,000 Шаардлагатай бол MilliQ ионгүйжүүлсэн усыг шинжилгээнд хэрэглэнэ.
Хөндлөн холбох урвалд ашигласан эхлэл материалын хувьд (HA 2%, H2O, 1% NaOH, 0.049 мМ BDDE) эдгээр материалаас бэлтгэсэн дээж тус бүрээс 1 мл-ийг шинжилгээний ижил нөхцөл ашиглан шинжилсэн.
Ионы зураг дээр гарч буй оргилуудын өвөрмөц байдлыг тодорхойлохын тулд 20 мкл дээжинд 10 мкл 100 ppb BDDE стандарт уусмал (Sigma-Aldrich Co) нэмсэн.Энэ тохиолдолд дээж тус бүрийн стандартын эцсийн концентраци 37 ppb байна.
Эхлээд 10 мкл стандарт BDDE (Sigma-Aldrich Co)-г 990 мкл MilliQ усаар (нягтрал 1.1 г/мл) шингэлж, 11,000 мг/л (11,000 ppm) концентрацитай BDDE нөөцийн уусмал бэлтгэнэ.Завсрын стандарт шингэрүүлэлт болгон 110 мкг/л (110 ppb) BDDE уусмал бэлтгэхийн тулд энэ уусмалыг ашиглана.Дараа нь завсрын BDDE стандарт шингэрүүлэгчийг (110 ppb) ашиглан завсрын шингэрүүлэгчийг хэд хэдэн удаа шингэлж, хүссэн концентраци 75, 50, 25, 10, 1 ppb-д хүрэхийн тулд стандарт муруйг бэлтгэнэ.Зураг 1-ээс харахад BDDE стандарт муруй нь 1.1-ээс 110 ppb хүртэлх шугаман чанар сайтай (R2>0.99) байна.Стандарт муруйг дөрвөн бие даасан туршилтаар давтан хийсэн.
Зураг 1 BDDE стандарт тохируулгын муруйг LC-MS шинжилгээгээр олж авсан бөгөөд үүнд сайн хамаарал ажиглагдаж байна (R2>0.99).
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр.
Хөндлөн холбоос бүхий HA-д байгаа BDDE стандартууд болон үндсэн уусмал дахь BDDE стандартуудыг тодорхойлох, тоон үзүүлэлтийг гаргахын тулд LC-MS шинжилгээг ашигласан.
Хроматографийн тусгаарлалтыг LUNA 2.5 μm C18(2)-HST багана (50×2.0 мм2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) дээр хийж, шинжилгээний явцад өрөөний температурт (25°C) хадгалсан.Хөдөлгөөнт үе шат нь ацетонитрил (уусгагч А) ба 0.1% шоргоолжны хүчил агуулсан ус (уусгагч В) зэргээс бүрдэнэ.Хөдөлгөөнт үе шат нь градиент элюцээр ялгардаг.Градиент нь дараах байдалтай байна: 0 минут, 2% A;1 минут, 2% A;6 минут, 98% A;7 минут, 98% A;7.1 минут, 2% A;10 минут, 2% A. Ажиллах хугацаа 10 минут, тарилгын хэмжээ 20 мкл.BDDE-ийг хадгалах хугацаа нь ойролцоогоор 3.48 минут (туршилт дээр үндэслэн 3.43-аас 4.14 минутын хооронд хэлбэлздэг).Хөдөлгөөнт фазыг LC-MS шинжилгээнд зориулж 0.25 мл/мин урсгалын хурдаар шахав.
BDDE-ийн шинжилгээ ба тоон үзүүлэлтийг MS-ээр тодорхойлохын тулд UPLC системийг (Ус) цахилгаан шүршигч иончлолын эх үүсвэрээр тоноглогдсон API 3000 гурвалсан дөрвөлжин массын спектрометр (AB SCIEX) -тай хослуулж, эерэг ион горимд (ESI+) шинжилгээг хийдэг.
BDDE дээр хийсэн ионы фрагментийн шинжилгээний дагуу хамгийн их эрчимтэй фрагмент нь 129.1 Да-д тохирох фрагмент болохыг тогтоосон (Зураг 6).Иймд олон ионы хяналтын горимд (MIM) тоо хэмжээг тодорхойлоход BDDE-ийн массын хувиргалт (масс-цэнэгийн харьцаа [м/з]) 203.3/129.1 Да байна.Мөн LC-MS шинжилгээнд бүрэн скан (FS) горим болон бүтээгдэхүүний ион скан (PIS) горимыг ашигладаг.
Аргын өвөрмөц байдлыг шалгахын тулд хоосон дээжийг (эхний хөдөлгөөнт үе шат) шинжилсэн.203.3/129.1 Да массын хувиргалттай хоосон дээжинд ямар ч дохио илрээгүй.Туршилтын давтагдах байдлын тухайд 55 ppb (шалгалт тохируулгын муруйн дунд) 10 стандарт тарилгад дүн шинжилгээ хийсэн бөгөөд үүний үр дүнд үлдэгдэл стандарт хазайлт (RSD) <5% (өгөгдлийг харуулаагүй).
BDDE-ийн үлдэгдэл агуулгыг 8 өөр автоклавт BDDE хөндлөн холбоостой HA гидрогельд хэмжсэн бөгөөд энэ нь бие даасан дөрвөн туршилтад харгалзах болно.“Материал ба арга” хэсэгт тайлбарласны дагуу хэмжигдэхүүнийг BDDE стандарт шингэрүүлэлтийн регрессийн муруйн дундаж утгаар үнэлдэг бөгөөд энэ нь BDDE массын шилжилтийн 203.3/129.1 Да, хадгалалттай үед илэрсэн өвөрмөц оргилд тохирч байна. 3.43-аас 4.14 минутын хугацаа Хүлээхгүй байна.Зураг 2-т 10 ppb BDDE лавлагааны стандартын жишээ хроматограммыг үзүүлэв.Хүснэгт 1-д найман өөр гидрогелийн үлдэгдэл BDDE агуулгыг нэгтгэн харуулав.Утгын хүрээ нь 1-ээс 2.46 ppb байна.Иймээс дээж дэх BDDE-ийн үлдэгдэл концентрацийг хүний хэрэглээнд (<2 ppm) зөвшөөрнө.
Зураг 2 203.30/129.10 Да (эерэг MRM горимд) LC-MS шинжилгээгээр олж авсан 10 ppb BDDE лавлагаа стандарт (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) шилжилтийн ионы хроматограмм.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт;MS, масс;m/z, массын цэнэгийн харьцаа.
Тайлбар: Дээж 1-8 нь автоклавт BDDE хөндлөн холбоостой HA гидрогель юм.Гидрогель дэх BDDE-ийн үлдэгдэл хэмжээ болон BDDE хадгалах хугацааны оргил үеийг мөн мэдээлсэн болно.Эцэст нь, өөр өөр хадгалалтын хугацаатай шинэ оргилууд байгаа тухай мэдээлсэн.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;HA, гиалуроны хүчил;MRM, олон урвалын хяналт;tR, хадгалах хугацаа;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;RRT, харьцангуй хадгалах хугацаа.
Гайхалтай нь, LC-MS ионы хроматограммын дүн шинжилгээ нь бүх автоклавт хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийн шинжилгээнд үндэслэн 2.73-аас 3.29 минут хүртэл богино хадгалалтын хугацаанд нэмэлт оргил байгааг харуулсан.Жишээлбэл, 3-р зурагт хөндлөн холбоос бүхий HA дээжийн ионы хроматограммыг харуулсан бөгөөд ойролцоогоор 2.71 минутын өөр хадгалах хугацаанд нэмэлт оргил гарч ирдэг.Шинээр ажиглагдсан оргил ба BDDE-ийн оргилын хоорондох ажиглагдсан харьцангуй хадгалах хугацаа (RRT) 0.79 байна (Хүснэгт 1).Шинээр ажиглагдсан оргил нь LC-MS шинжилгээнд ашигласан C18 баганад бага хадгалагдаж байгааг бид мэдэж байгаа тул шинэ оргил нь BDDE-ээс илүү туйлтай нэгдэлтэй тохирч магадгүй юм.
Зураг 3 LC-MS (MRM массын хувиргалт 203.3/129.0 Да)-аар олж авсан хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийн дээжийн ион хроматограмм.
Товчлол: HA, гиалуроны хүчил;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт;RRT, харьцангуй хадгалах хугацаа;tR, хадгалах хугацаа.
Ажиглагдсан шинэ оргилууд нь ашигласан түүхий эдэд анх орсон бохирдуулагч байж болзошгүйг үгүйсгэхийн тулд эдгээр түүхий эдийг мөн LC-MS шинжилгээний ижил аргыг ашиглан шинжилсэн.Шинжилгээнд хамрагдсан эхлэл материалд ус, усан дахь 2% NaHA, усанд 1% NaOH, хөндлөн холбоосын урвалд ашигласан ижил концентрацитай BDDE орно.Ашигласан эхлэлийн материалын ионы хроматограмм нь ямар ч нэгдэл эсвэл оргилыг харуулаагүй бөгөөд түүнийг хадгалах хугацаа нь ажиглагдсан шинэ оргил үетэй тохирч байна.Энэ баримт нь зөвхөн эхлэл материал нь шинжилгээний процедурт саад учруулж болзошгүй аливаа нэгдлүүд эсвэл бодисуудыг агуулж болохоос гадна бусад лабораторийн бүтээгдэхүүнтэй хөндлөн бохирдсон шинж тэмдэг байхгүй гэсэн санааг үгүйсгэж байна.BDDE болон шинэ оргилуудын LC-MS шинжилгээний дараа олж авсан концентрацийн утгыг Хүснэгт 2 (дээж 1-4), ионы хроматограммыг Зураг 4-т үзүүлэв.
Тайлбар: Дээж 1-4 нь автоклавт BDDE хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийг үйлдвэрлэхэд ашигласан түүхий эдтэй тохирч байна.Эдгээр дээжийг автоклавт оруулаагүй.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;HA, гиалуроны хүчил;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт.
Зураг 4 нь HA ба BDDE-ийн хөндлөн холбоосын урвалд ашигласан түүхий эдийн дээжийн LC-MS хроматограммтай тохирч байна.
Тайлбар: Эдгээрийг бүгдийг нь хөндлөн холбох урвал явуулахад ашигладаг ижил концентраци, харьцаагаар хэмждэг.Хроматограммд дүн шинжилгээ хийсэн түүхий эдүүдийн тоо нь: (1) ус, (2) 2% ГА усан уусмал, (3) 1% NaOH усан уусмал.LC-MS шинжилгээг 203.30/129.10 Да (эерэг MRM горимд) массаар хөрвүүлэх зорилгоор хийдэг.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;HA, гиалуроны хүчил;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт.
Шинэ оргил үүсэхэд хүргэсэн нөхцөл байдлыг судалсан.Хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийг үйлдвэрлэхэд ашигласан урвалын нөхцөл нь BDDE хөндлөн холбоосын агентын урвалд хэрхэн нөлөөлж, шинэ оргил (давар бүтээгдэхүүн байж болзошгүй) үүсэхэд хүргэдэг болохыг судлахын тулд янз бүрийн хэмжилт хийсэн.Эдгээр тодорхойлохдоо бид усан орчинд өөр өөр концентрацитай NaOH (0%, 1%, 0.1%, 0.01%), дараа нь автоклавт эсвэл автоклавгүйгээр боловсруулсан эцсийн BDDE хөндлөн холбогчийг судалж, дүн шинжилгээ хийсэн.Ижил нөхцөлийг дуурайлган хийх бактерийн процедур нь хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогелийг үйлдвэрлэхэд ашигладаг аргатай ижил байна.“Материал ба арга” хэсэгт тайлбарласны дагуу дээжийн массын шилжилтийг LC-MS-ээр 203.30/129.10 Да хүртэл шинжилсэн.BDDE болон шинэ оргилын концентрацийг тооцоолж үр дүнг 3-р хүснэгтэд үзүүлэв. Уусмал дахь NaOH байгаа эсэхээс үл хамааран автоклавт ороогүй дээжинд шинэ оргил илрээгүй (дээж 1-4, Хүснэгт. 3).Автоклавт хийсэн дээжийн хувьд шинэ оргилууд нь зөвхөн уусмалд NaOH байгаа тохиолдолд л илэрдэг бөгөөд оргил үүсэх нь уусмал дахь NaOH-ийн агууламжаас (дээж 5-8, Хүснэгт 3) хамаардаг бололтой (RRT = 0.79).Зураг 5-д NAOH байгаа эсвэл байхгүй хоёр автоклавт дээжийг харуулсан ионы хроматограммын жишээг үзүүлэв.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт.
Тайлбар: Дээд талын хроматограмм: Дээжийг 0.1% NaOH усан уусмалаар боловсруулж, автоклавт (120°С-т 20 минут) халаана.Доод хроматограмм: Дээжийг NaOH-ээр боловсруулаагүй, харин ижил нөхцөлд автоклавт хадгалсан.203.30/129.10 Да (эерэг MRM горимд) массын хувиргалтыг LC-MS-ээр шинжилсэн.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт.
Бүх автоклавт сорьцонд NaOH-тай болон NaOH-гүй BDDE-ийн концентраци ихээхэн буурсан (16.6 дахин) (дээж 5-8, Хүснэгт 2).BDDE-ийн концентраци буурсан нь өндөр температурт ус нь суурь (нуклеофил) болж BDDE-ийн эпоксидын цагиргийг нээж, 1,2-диолын нэгдэл үүсгэдэгтэй холбоотой байж болох юм.Энэ нэгдлийн моноизотоп чанар нь BDDE-ийн чанараас ялгаатай тул нөлөөлөхгүй.LC-MS нь 203.30/129.10 Да-ийн массын шилжилтийг илрүүлсэн.
Эцэст нь эдгээр туршилтууд нь шинэ оргилууд үүсэх нь BDDE, NAOH, автоклавын процессоос хамаардаг боловч HA-тай ямар ч холбоогүй болохыг харуулж байна.
Ойролцоогоор 2.71 минутын хадгалалтын хугацаанд олдсон шинэ оргил нь дараа нь LC-MS-ээр тодорхойлогддог.Энэ зорилгоор BDDE (9.9 мг/мл) 1% NaOH усан уусмалд өсгөвөрлөж, автоклавт хадгалсан.Хүснэгт 4-д шинэ оргилын шинж чанарыг мэдэгдэж буй BDDE лавлагааны оргил (хадгалах хугацаа ойролцоогоор 3.47 минут)-тай харьцуулсан болно.Хоёр оргилын ионы хуваагдлын шинжилгээнд үндэслэн 2.72 минутын хадгалалтын хугацаатай оргил нь BDDE оргилтой ижил фрагментуудыг харуулж байгаа боловч өөр өөр эрчимтэй байна гэж дүгнэж болно (Зураг 6).Хадгалах хугацаа (PIS) 2.72 минутад тохирох оргил үед 147 Да масстай хуваагдсаны дараа илүү эрчимтэй оргил ажиглагдсан.Энэ тодорхойлоход ашигласан BDDE концентрацид (9.9 мг/мл) хэт ягаан туяаны спектрийн янз бүрийн шингээлтийн горимууд (хэт ягаан туяа, λ=200 нм) хроматографийн аргаар ялгасны дараа мөн ажиглагдсан (Зураг 7).2.71 минутын хадгалалтын хугацаатай оргил нь 200 нм-д харагдах хэвээр байгаа бол BDDE оргил нь ижил нөхцөлд хроматограммд ажиглагдахгүй.
Хүснэгт 4. 2.71 минут орчим хадгалагдах хугацаатай шинэ оргил ба 3.47 минут хадгалагдах хугацаатай BDDE оргилын шинж чанарын үр дүн.
Тайлбар: Эдгээр үр дүнг авахын тулд LC-MS болон HPLC шинжилгээг (MRM болон PIS) хоёр оргил дээр хийсэн.HPLC шинжилгээнд 200 нм долгионы урттай хэт ягаан туяаны илрүүлэлтийг ашигладаг.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;HPLC, өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматографи;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт;m / z, массын цэнэгийн харьцаа;PIS, бүтээгдэхүүний ион сканнердах;хэт ягаан туяа, хэт ягаан туяа.
Тайлбар: Массын хэсгүүдийг LC-MS шинжилгээгээр (PIS) олж авсан.Дээд хроматограмм: BDDE стандарт дээжийн хэсгүүдийн массын спектр.Доод хроматограмм: Илэрсэн шинэ оргилын массын спектр (BDDE оргилтой холбоотой RRT нь 0.79).BDDE-ийг 1% NaOH уусмалд боловсруулж, автоклавт хийсэн.
Товчлол: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl эфир;LC-MS, шингэний хроматографи ба масс спектрометр;MRM, олон урвалын хяналт;PIS, бүтээгдэхүүний ионы сканнер;RRT, харьцангуй хадгалах хугацаа.
Зураг 7 203.30 Да прекурсор ионы ионы хроматограмм ба (A) 2.71 минутын хадгалах хугацаатай шинэ оргил ба (B) BDDE лавлагааны стандарт оргилын хэт ягаан туяаны илрүүлэлт 200 нм-д 3.46 минут.
Үйлдвэрлэсэн бүх хөндлөн холбоос бүхий HA гидрогельд LC-MS-ийн хэмжилтийн дараа BDDE-ийн үлдэгдэл концентраци <2 ppm байгаа нь ажиглагдсан боловч шинжилгээнд үл мэдэгдэх шинэ оргил гарч ирэв.Энэхүү шинэ оргил нь BDDE стандарт бүтээгдэхүүнтэй таарахгүй байна.BDDE стандарт бүтээгдэхүүн нь эерэг MRM горимд ижил чанарын хувиргалт (MRM хувиргалт 203.30/129.10 Да) шинжилгээнд хамрагдсан.Ерөнхийдөө хроматографи зэрэг бусад аналитик аргуудыг гидрогель дэх BDDE-ийг илрүүлэх хязгаарын туршилт болгон ашигладаг боловч илрүүлэх дээд хязгаар (LOD) нь 2 ppm-ээс бага зэрэг бага байдаг.Нөгөөтэйгүүр, өнөөг хүртэл NMR ба MS-ийг хөндлөн холбоос бүхий HA бүтээгдэхүүний чихрийн нэгжийн хэсгүүдэд HA-ийн хөндлөн холбоос ба/эсвэл өөрчлөлтийн зэрэглэлийг тодорхойлоход ашиглаж байна.Эдгээр аргуудын зорилго нь бидний энэ өгүүлэлд тайлбарласан шиг бага концентрацитай BDDE-ийн үлдэгдэл илрүүлэлтийг тоолж байгаагүй (бидний LC-MS аргын LOD = 10 ppb).
Шуудангийн цаг: 2021 оны 9-р сарын 01